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液相色譜儀分析系統(tǒng)的洗脫方式和注意要點(diǎn)

作者: 2015年03月10日 來(lái)源: 瀏覽量:
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液相色譜儀有等強(qiáng)度洗脫和梯度洗脫兩種方式。等度洗脫是指實(shí)驗(yàn)過(guò)程中(做樣過(guò)程)從頭到尾只用一種流動(dòng)相。也就是只用一個(gè)泵,輸送同一種流動(dòng)相。梯度洗脫是指在同一個(gè)分析周期中隨著時(shí)間的變化按一定程序梯度性地改

      液相色譜儀有等強(qiáng)度洗脫和梯度洗脫兩種方式。等度洗脫是指實(shí)驗(yàn)過(guò)程中(做樣過(guò)程)從頭到尾只用一種流動(dòng)相。也就是只用一個(gè)泵,輸送同一種流動(dòng)相。梯度洗脫是指在同一個(gè)分析周期中隨著時(shí)間的變化按一定程序梯度性地改變洗脫液的比例(濃度配比、成分、離子強(qiáng)度、溶液極性等)或pH,以期將層析柱上不同的組分洗脫出來(lái)的方法。從而可以使一個(gè)復(fù)雜樣品中性質(zhì)(極性)差異較大的組分能按各自適宜的容量因 子k達(dá)到良好的分離目的。梯度洗脫一般分為二元高壓梯度,二元低壓梯度和四元低壓梯度;二元高壓梯度需要兩臺(tái)高壓泵,二元低壓梯度和四元低壓梯度都是只需要一臺(tái)高壓泵和一個(gè)比列閥。

      兩種溶劑組成的梯度洗脫可按任意程度混合,即有多種洗脫曲線:線性梯度、凹形梯度、凸形梯度和階梯形梯度。線性梯度最常用,尤其適合于在反相柱上進(jìn)行梯度洗脫。 
      在進(jìn)行梯度洗脫時(shí),由于多種溶劑混合,而且組成不斷變化,因此帶來(lái)一些特殊問(wèn)題,必須充分重視:
      ①要注意溶劑的互溶性,不相混溶的溶劑不能用作梯度洗脫的流動(dòng)相,有些溶劑在一定比例內(nèi)混溶,超出范圍就不互溶,使用時(shí)更要引起注意。當(dāng)有機(jī)溶劑和緩沖液混合時(shí),還可能析出鹽的晶體,尤其使用磷酸鹽時(shí)需特別小心。 
      ②梯度洗脫所用的溶劑純度要求更高,以保證良好的重現(xiàn)性。進(jìn)行樣品分析前必須進(jìn)行空白梯度洗脫,以辨認(rèn)溶劑雜質(zhì)峰,因?yàn)槿跞軇┲械碾s質(zhì)富集在色譜柱頭后會(huì)被強(qiáng)溶劑洗脫下來(lái)。用于梯度洗脫的溶劑需徹底脫氣,以防止混合時(shí)產(chǎn)生氣泡。 
      ③混合溶劑的粘度常隨組成而變化,因而在梯度洗脫時(shí)常出現(xiàn)壓力的變化。例如甲醇和水粘主度都較小,當(dāng)二者以相近比例混合時(shí)粘度增大很多,此時(shí)的柱壓大約是甲醇或水流動(dòng)相時(shí)的兩倍。因此要注意防止梯度洗脫過(guò)程中壓力超過(guò)輸液泵或色譜柱能承受的最大壓力。

      ④每次梯度洗脫之后必須對(duì)色譜柱進(jìn)行再生處理,使其恢復(fù)到初始流動(dòng)相流經(jīng)色譜柱,使固定相與初始流動(dòng)相達(dá)到完全平衡。

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