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《肌動蛋白抗體測定免疫印跡法》意見征求

作者： 2020年04月14日來源：全球化工設(shè)備網(wǎng) 瀏覽量：

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為此，中國測試技術(shù)研究院、正能生物、中國測試技術(shù)研究院生物研究所、青島科技大學等單位在國家標準化管理委員會的主管下，起草編制了《肌動蛋白抗體測定免疫印跡法》。日前，該標準已經(jīng)編制完成，如今正面向社會征

　　有研究表明，肌動蛋白可以進入循環(huán)系統(tǒng)如血液、腦脊液及其他生物體液，如淋巴液、尿液、支氣管肺泡灌洗液中，不僅可以作為細胞損傷的標志物,而且可能有直接的致死效應(yīng)。而F-肌動蛋白可作為一種自身抗原，參與自身免疫性疾病的發(fā)生發(fā)展，疾病相關(guān)抗肌動蛋白抗體也可作為多種疾病的預(yù)后生物標志物，為疾病診斷提供可信賴的依據(jù)。

　　進一步研究肌動蛋白在細胞外的存在形式及其在生理與病理反應(yīng)過程中的作用，不僅僅對基礎(chǔ)醫(yī)學，更是對許多重大疾病的診斷、預(yù)防及治療有重要意義。為此，中國測試技術(shù)研究院、正能生物、中國測試技術(shù)研究院生物研究所、青島科技大學等單位在國家標準化管理委員會的主管下，起草編制了《肌動蛋白抗體測定免疫印跡法》。日前，該標準已經(jīng)編制完成，如今正面向社會征求意見。意見征求時間截止至2020年6月8日。

　　閱讀標準征求意見稿后可知，《肌動蛋白抗體測定免疫印跡法》引用了GB/T6682《分析實驗室用水規(guī)格和實驗方法》，規(guī)定了基于免疫印跡法的肌動蛋白抗體表現(xiàn)分子量測定、效價驗證、物種反應(yīng)以及穩(wěn)定性試驗。

　　據(jù)悉，免疫印跡法原理是SDS與蛋白質(zhì)分子結(jié)合形成帶負電荷的蛋白質(zhì)SDS復(fù)合物。在電場的作用下，蛋白質(zhì)SDS復(fù)合物向帶有異向電荷的電極移動。根據(jù)聚丙烯酸胺凝膠分子篩效應(yīng)，復(fù)合物遷移速度與其分子量成負相關(guān)。將電泳分離的組分轉(zhuǎn)移并固定在化學合成膜等固相載體后，以特定的免疫反應(yīng)以及顯色系統(tǒng)分析印跡。

　　免疫印跡法需要的儀器設(shè)備有電子天平、垂直凝膠系統(tǒng)、轉(zhuǎn)移系統(tǒng)、電泳儀、離心機、均質(zhì)器、硝酸纖維膜、旋渦振蕩器、掃描儀和離心管。該方法的步驟如下：稱取1mg蛋白粉末加入1mL蒸餾水中溶解，使母液濃度為1mg/mL；將長滿CHO細胞的培養(yǎng)瓶放置在冰上，用吸液管吸出培養(yǎng)液，加入足夠的冷的PBS在培養(yǎng)瓶中充分洗滌細胞表面；向培養(yǎng)瓶中加入冷的NP-40裂解液，然后用細胞刮子沿著瓶壁開始刮細胞；重復(fù)第一個步驟以盡可能多的收集到細胞裂解液到離心管中；取出少量細胞裂解液測定蛋白濃度分裝保存在-70℃；電泳至溴酚藍到達分離膠底部；最后對其進行印跡、免疫反應(yīng)。

　　我國現(xiàn)行的法規(guī)和標準中，沒有關(guān)于肌動蛋白抗體測定免疫印跡法的標準，而本標準填補了肌動蛋白抗體測定免疫印跡法檢測指導(dǎo)文件、技術(shù)操作細節(jié)的缺失，相信本標準能對肌動蛋白抗體測定免疫印跡法檢測提供更為準確、快速、規(guī)范的法則以提高檢測工作效率和降低檢測成本。

　　更多詳情請點擊：《肌動蛋白抗體測定免疫印跡法》征求意見稿

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標簽：《肌動蛋白抗體測定免疫印跡法》

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