生鮮乳、滅菌乳、復(fù)原乳、國產(chǎn)奶、進(jìn)口奶，市面上各式各樣的乳制品已讓人眼花繚亂。消費者或許對乳制品的分類不甚了解也不太在意，然而怎么選一款好牛奶卻是大家始終關(guān)心的問題，今天我們特意來聊聊復(fù)原乳。
 　A：最近保健品質(zhì)量亂象頻頻被曝，感覺走親訪友還是送乳制品比較放心，但是市面上乳制品品牌眾多，我們也不太清楚如何區(qū)分哪些乳制品中添加了復(fù)原乳？
 　B：NY/T 939-2016“巴氏殺菌乳和UHT滅菌乳中復(fù)原乳的鑒定”中指出可以通過乳果糖含量來判斷巴氏殺菌乳和UHT滅菌乳中是否添加復(fù)原乳。
 　C：2018年2月發(fā)布的國家食品安全標(biāo)準(zhǔn)關(guān)于生乳、巴氏殺菌乳、滅菌乳、和復(fù)原乳鑒定第一次討論稿中滅菌乳標(biāo)準(zhǔn)中乳果糖含量作為理化指標(biāo)被要求；復(fù)原乳鑒定標(biāo)準(zhǔn)中完善了乳果糖測定方法中的試劑配制。
 　D：那么到底如何測定乳果糖來鑒定復(fù)原乳呢？

 　聚光科技（杭州）股份有限公司下屬子公司上海安譜實驗科技股份有限公司（以下簡稱“安譜實驗”）利用快速檢測試劑盒的方法對乳果糖進(jìn)行檢測并提供全套解決方案和試劑耗材。
配套產(chǎn)品，一鍵采購試劑盒，解決繁瑣采購
 　搭配乳果糖和D- 果糖分析物標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)；
 　試劑盒滿足50次檢測，避免拼湊購買造成的浪費；
 　提供試劑盒內(nèi)試劑的單獨購買；
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 　直接提供預(yù)配置的測試液，避免繁瑣的配制；
 　試劑盒方法原理同NYT 939-2016；
 　和NY/T 939-2016方法相比，試劑盒方法節(jié)省3h，完成反應(yīng)僅需2h；
 　Megazyme Mega-CalcTM一鍵數(shù)據(jù)處理，準(zhǔn)確、方便；
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 　吸光度不穩(wěn)定、平行性不好、數(shù)據(jù)準(zhǔn)確度不高、實驗細(xì)節(jié)把握不好，通通不是問題，安譜實驗資深技術(shù)人員手把手指導(dǎo)和解答。

一、樣品前處理
 　取某品牌市售純牛奶（記為原奶），并將其分別稀釋2倍，5倍，10倍（記為原奶*2，原奶*5，原奶*10）待取用；分別取原奶、原奶*2，原奶*5，原奶*10、和100 ppm標(biāo)準(zhǔn)品各0.5 mL于1.5 mL離心管中，加入0.2 mL磷酸鈉緩沖液、0.7 mL去離子水、0.05 mL硫酸鋅溶液、0.05 mL亞鐵氰化鉀溶液，混合均勻，在13000轉(zhuǎn)速下離心10 min，沉淀牛奶中的蛋白質(zhì)和脂肪，吸取上清液進(jìn)行實驗。
注意事項：
 　離心后溶液應(yīng)該為澄清的溶液，否則建議稀釋樣品或者再分別加入0.05 mL沉淀試劑：硫酸鋅溶液和亞鐵氰化鉀溶液（為避免誤差，加入沉淀劑的情況也請考慮沉淀劑對樣品的稀釋影響）；
 　樣品沉淀以后應(yīng)該為澄清的溶液，取上清液時注意不要將沉淀吸入。

檢測樣品包括：

樣品	原奶		原奶*2		原奶*5		原奶*10		100ppm標(biāo)品
	兩個平行樣		兩個平行樣		兩個平行樣		兩個平行樣		兩個平行樣
編號	A	B	C	D	E	F	G	H	I	J
	A空白	B空白	C空白	D空白	E空白	F空白	G空白	H空白	I空白	J空白

 

二、酶解實驗
 　分別吸取0.5 mL的上清液于1.5 mL的離心管中（其中編號A-J為樣品，加入β-半乳糖苷酶進(jìn)行酶解；A空白-J空白為空白樣，不加β-半乳糖苷酶；空白樣的目的是扣除空白）。

每個樣品分別按照以下步驟進(jìn)行實驗：

添加溶液	添加體積數(shù)
	A-J 樣品	A-J 空白
樣品前處理后的上清液	0.50 mL	0.50 mL
乙酸鈉緩沖液（0.2 M）	0.10 mL	0.10 mL
去離子水	-	0.05 mL
瓶1（β-半乳糖苷酶）	0.05 mL	-
漩渦混合，并于40℃水浴中反應(yīng)1小時，然后分別加入以下溶液，每加一個溶液，要蓋上螺帽進(jìn)行漩渦混合。
TEA緩沖液（1 M）/硫酸鎂（10 mM）	0.50 mL	0.50 mL
氫氧化鈉溶液（0.33 M）	0.05 mL	0.05 mL
辛醇	0.01 mL	0.01 mL
瓶2懸浮液（葡萄糖氧化酶和過氧化氫酶）	0.05 mL	0.05 mL
30%過氧化氫	0.02 mL	0.02 mL
加完后蓋上螺帽于40℃水浴中反應(yīng)15min，15min后于13000rmp離心10min，取上清液作為酶測試反應(yīng)。注意：加入過氧化氫后不管是樣品還是樣品空白會產(chǎn)生氣泡，無氣泡產(chǎn)生說明實驗可能失敗。

 

三、酶測試反應(yīng)

添加溶液	添加體積數(shù)
	A-J 樣品	A-J 空白
樣品酶解實驗后的上清液	1.00mL	1.00 mL
瓶3緩沖液	0.05 mL	0.05 mL
瓶4稀釋液（NADP+/ATP)	0.05 mL	0.05 mL
將上述溶液分別加入一次性的比色皿中，每加一個溶液蓋上比色皿蓋子手動搖晃均勻，然后反應(yīng)3min，在340nm處檢測紫外吸光度，讀數(shù)為A1，然后加入以下溶液進(jìn)一步反應(yīng)。
瓶5懸浮液（HK/G-6-PDH)	0.02 mL	0.02 mL
瓶6懸浮液（6-PGDH)	0.02 mL	0.02 mL
每加一個溶液蓋上比色皿蓋子手動搖晃均勻，然后反應(yīng)10min，在340nm處檢測紫外吸光度，讀數(shù)為A2，然后加入以下溶液進(jìn)一步反應(yīng)。
瓶7懸浮液（PGI)	0.02 mL	0.02 mL
加入以上溶液手動搖晃均勻，然后反應(yīng)15min，在340nm處檢測紫外吸光度，讀數(shù)為A3。注意：在檢測紫外吸光度A1-A3過程中，吸光度的大小會在一定范圍內(nèi)波動，波動過大或者不穩(wěn)定請排查各個實驗步驟，找出問題。

 

四、數(shù)據(jù)分析
 　將測試的數(shù)據(jù)代入乳果糖試劑盒的Megazyme Mega-CalcTM進(jìn)行計算（在Megazyme下載），得出檢測數(shù)據(jù)：

樣品	原奶		原奶*2		原奶*5		原奶*10		100ppm標(biāo)品
	兩個平行樣		兩個平行樣		兩個平行樣		兩個平行樣		兩個平行樣
編號	A	B	C	D	E	F	G	H	I	J
計算最終濃度（ppm）	474.6	472.2	484.8	487.4	484	499.7	493.7	500.9	97.3	101.6
平均值	473.4		486.1		491.8		497.3		99.5
結(jié)論	A3-A2＞1.5，需對樣品進(jìn)行稀釋；檢測值偏低		樣品稀釋2倍，5倍，10倍后通過Megazyme Mega-CalcTM進(jìn)行計算，換算為原奶含乳果糖濃度，相互比較，誤差都在2%以內(nèi)，符合檢測要求。						平行樣檢測的數(shù)值與標(biāo)準(zhǔn)樣品的濃度相符，平行樣差值低于1%。